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7WD10
7WD10
規(guī)格:
貨期:
編號(hào):MZ-3194
品牌:Mingzhoubio

活化細(xì)胞
凍存細(xì)胞
熒光標(biāo)記細(xì)胞

規(guī)格:
T25瓶
凍存管

產(chǎn)品名稱 7WD10
商品貨號(hào) MZ-3194
中文名稱 人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株
組織來源 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞
形態(tài)特征 梭形
特征特性 采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞野生型AβPPTS1 基因,所得細(xì)胞表達(dá)野生型AβPPTS1蛋白
細(xì)胞污染 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)陰性。
培養(yǎng)條件 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,添加250ug/ml G418。
傳代方法 1:2到1:5的比例
細(xì)胞凍存步驟 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復(fù)蘇細(xì)胞步驟 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞傳代步驟 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
凍存條件 90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存
姓名 手機(jī)號(hào)(微信同號(hào)) QQ
梅經(jīng)理 17280875617 1438578920
胡經(jīng)理 13345964880 2438244627
周經(jīng)理 17757487661 1296385441
于經(jīng)理 18067160830 2088210172
沈經(jīng)理 19548299266 2662369050
李經(jīng)理 13626845108 972239479
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