表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞（HepG2.2.15）介紹：乙型肝炎病毒（HBV）是一種引起急性和慢性壞死炎癥性肝病及肝細(xì)胞癌的DNA病毒。HBV 具有特異嗜肝性、非細(xì)胞損傷與裂解、易發(fā)展為慢性等特征。表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞（HepG2.2.15）是能夠表達(dá)HBV 抗原和分泌完整HBV 顆粒的肝胚瘤細(xì)胞系，也是目前用來(lái)研究HBV復(fù)制．肝細(xì)胞對(duì)干擾素（IFN）應(yīng)答最為合適的細(xì)胞。
表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞（HepG2.2.15）特性：
1） 來(lái)源：肝
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝
運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm 培養(yǎng)皿或者T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞（HepG2.2.15）用途：僅供科研使用。
表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞（HepG2.2.15）培養(yǎng)步驟：
一．表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞（HepG2.2.15）培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM-H 培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO31.5g/L,2mM L-谷氨酰胺，500μg/ml G418)，95%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，5%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?a href="http://www.ejhuxd.cn/goods-2730.html">細(xì)胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞1-2 次。
2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO 后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng)：
1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
