二．使用方法

1、您收到細(xì)胞后，請按照以下方法進行操作：

取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后離心換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細(xì)胞傳代：

待細(xì)胞達到一定密度（不超過1x10^6/ml）可按照以下方法換液培養(yǎng)或傳代。

方法①：收集細(xì)胞，1000rpm離心5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法②：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

貼壁細(xì)胞需要用胰酶進行消化。

3、細(xì)胞凍存：

1）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

2）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

3）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細(xì)胞復(fù)蘇： 1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁； 2）將凍存管中的細(xì)胞移至含10ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注：培養(yǎng)瓶內(nèi)非完全培養(yǎng)基，請務(wù)必使用準(zhǔn)備好的新鮮培養(yǎng)基。懸浮細(xì)胞運輸中會有少些細(xì)胞因為碰撞裂解產(chǎn)生碎片，收到細(xì)胞如碎片較多時，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)三天，利于細(xì)胞盡快恢復(fù)狀態(tài)，細(xì)胞穩(wěn)定后再調(diào)回10%即可。